TIÊU CHUẨN VIỆT NAM

TCVN 8686-2:2011

THUỐC THÚ Y – PHẦN 2: CANXI GLUCONAT, VITAMIN B₁₂\r\nVÀ VITAMIN B₁ DẠNG TIÊM

Veterinary\r\ndrugs - Part 2: Injectable calcium gluconat, vitamin B_12\r\nand vitamin B₁

1. Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này áp dụng cho thuốc canxi gluconat, vitamin B₁₂\r\nvà vitamin B₁ dạng tiêm dùng trong thú y.

2. Tài liệu viện dẫn

Các tài liệu\r\nviện dẫn sau rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài\r\nliệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với các tài\r\nliệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả\r\ncác sửa đổi, bổ sung (nếu có).

Dược điển\r\nViệt Nam IV trang 116, 608, 204.

3. Yêu cầu kỹ thuật

3.1 Công\r\nthức pha chế

Canxi\r\ngluconat                           10,00 g

Vitamin B₁₂\r\n                               0,01 g

Vitamin B₁                                 0,50\r\ng

Nước cất\r\nvừa đủ                       100 ml

3.2 Nguyên\r\nliệu

Canxi\r\ngluconat               Theo tiêu chuẩn của nhà sản xuất.

Vitamin B_12\r\n                   Theo tiêu chuẩn của nhà sản xuất.

Vitamin B₁                     Theo\r\ntiêu chuẩn của nhà sản xuất.

Nước cất                      Đạt\r\ntiêu chuẩn Dược điển Việt Nam IV.

3.3 Chất\r\nlượng thành phẩm

3.3.1 Yêu\r\ncầu cảm quan

3.3.2 Yêu\r\ncầu về lý-hóa

4. Lấy mẫu

4.1 Nguyên\r\ntắc chung lấy mẫu

Lấy mẫu theo\r\nnguyên tắc ngẫu nhiên.

Lượng thuốc\r\ntrong mẫu phân tích cũng như trong mẫu lưu ít nhất phải đủ cho ba lần phân tích\r\nhoặc phải đủ để thực hiện các phép thử đảm bảo thu được kết quả chính xác và\r\ntin cậy. Lượng thuốc này được tính toán trên cơ sở tiêu chuẩn phương pháp thử\r\ncủa sản phẩm. Bình thường mỗi lô sản xuất được lấy hai mẫu (một mẫu phân tích\r\nvà một mẫu lưu).

Trường hợp\r\nđặc biệt, số mẫu phân tích và mẫu lưu có thể nhiều hơn hai để đủ gửi kiểm\r\nnghiệm và lưu ở nhiều nơi nếu xét thấy cần thiết.

4.2 Lấy mẫu\r\nthành phẩm

Mẫu được lấy\r\ntại những vị trí khác nhau của lô sản xuất, không được phá lẻ các đơn vị đóng\r\ngói sản phẩm để lấy mẫu. Từ các đơn vị lấy mẫu được tập hợp lại thành mẫu chung\r\nvà mẫu cuối cùng.

Số lượng mẫu\r\nthành phẩm cần lấy được qui định cụ thể dưới đây:

Trong trường\r\nhợp đặc biệt thì tùy theo quy cách đóng gói và tính chất của thuốc chỉ lấy mẫu\r\nđủ để phân tích và lưu.

5. Phương pháp thử

5.1 Kiểm tra\r\ncảm quan

Tiến hành\r\nkiểm tra cảm quan bằng mắt thường.

5.2 Phương\r\npháp xác định độ pH

Độ pH của\r\ndung dịch được đo bằng máy đo pH.

5.3 Phương\r\npháp xác định hàm lượng hoạt chất chính

5.3.1 Thuốc\r\nthử

5.3.1.1 Metanol\r\n(tinh khiết sắc ký).

5.3.1.2 Natri\r\nheptan sulfonat (C₇H₁₅NaO₃S).

5.3.1.3 Kali\r\nclorit (KCl).

5.3.1.4 Axit\r\naxetic băng (CH₃COOH).

5.3.1.5 Nước\r\ncất.

5.3.1.6 Dung\r\ndịch kali ferocyanid (K₄Fe(CN)₆.3H₂O).

5.3.1.7 Amoni\r\nclorit (NH₄Cl).

5.3.1.8 Dung\r\ndịch amoni oxalat 4 % ((COONH₄)2.H₂O).

5.3.1.9 Axit\r\nclohydric (HCl).

5.3.1.10 Polyetylen\r\nglycol.

5.3.1.11 Dung\r\ndịch trilon B 0,05 M.

5.3.1.12 Hỗn\r\nhợp chỉ thị calcon: nghiền trộn 0,1g calcon với 9,9 g natri sulfonat (Na₂SO₄)\r\nkhan.

5.3.1.13 Dung\r\ndịch natri hidroxit (NaOH) 10 M.

5.3.2 Thiết\r\nbị, dụng cụ

5.3.2.1 Máy\r\nsắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC-UV-vis).

5.3.2.2 Cột\r\nLichrosorb RP 8 (250 x 4,6 mm; 10 mm).

5.3.2.3 Cột\r\nLichrosorb RP 18 (250 x 4,6 mm; 10 mm)

5.3.2.4 Máy\r\nđo pH.

5.3.2.5 Máy\r\nlắc siêu âm.

5.3.2.6 Giấy\r\nlọc, cỡ lỗ 0,45 mm.

5.3.2.7 Cân\r\nphân tích, có thể chính xác đến 0,1 mg.

5.3.2.8 Bình\r\nđịnh mức, dung tích 20 ml, 25 ml, 50 ml và 1000 ml.

5.3.2.9 Bình\r\nnón, dung tích 500 ml.

5.3.2.10 Pipet,\r\ndung tích 2 ml, 3 ml, 5 ml và 10 ml.

5.3.3 Phương\r\npháp xác định

5.3.3.1 Phương\r\npháp định tính

5.3.3.1.1 Phương\r\npháp định tính B₁ và B₁₂

Thời gian\r\nlưu của vitamin B₁₂ và vitamin B₁ trùng với thời\r\ngian lưu của vitamin B₁₂ và vitamin B₁ chuẩn.

5.3.3.1.2 Phương\r\npháp định tính canxi gluconat

Mẫu thuốc\r\ncho phản ứng của ion canxi (Lấy 0,2 ml thuốc, thêm 5 ml dung dịch axit\r\naxetic 5 M, 0,5 ml dung dịch kali ferocyanid, thêm khoảng 0,05 g amoni clorit\r\ntạo thành kết tủa màu trắng).

Lấy 5 ml\r\nthuốc, thêm vài giọt dung dịch amoni oxalat 4 %, tạo thành kết tủa màu\r\ntrắng (kết tủa này ít tan trong axit axetic 6 M nhưng tan trong axit\r\nclohydric)

5.3.3.2 Phương\r\npháp định lượng

5.3.3.2.1 Định\r\nlượng vitamin B₁

5.3.3.2.1.1 Chuẩn\r\nbị pha động

- Natri heptan\r\nsulfonat                1,08 g

- Kali clorit                                2,0\r\ng

- Polyetylen\r\nglycol 400              2,0 ml

- Axit axetic\r\nbăng                      10 ml

- Metanol                                  130\r\nml

- Nước cất\r\nvừa đủ                     1 000 ml

Trộn đều,\r\nlọc qua giấy lọc có kích thước lỗ lọc 0,45 mm, loại khí\r\nbằng cách siêu âm 15 min.

5.3.3.2.1.2 Điều\r\nkiện sắc ký

- Cột\r\nLichrosorb RP 8 (250 x 4,6 mm; 10 mm).

- Detector\r\nUV-vis bước sóng 280 nm.

- Tốc độ\r\ndòng: 2 ml/min.

- Thể tích\r\nbơm: 20 ml.

5.3.3.2.1.3 Dung\r\ndịch chuẩn

Cân 0,05 g\r\nvitamin B₁ chuẩn, hoà tan vừa đủ trong 50 ml axit axetic 1,3 %\r\nlắc đều. Lấy 5 ml dung dịch này pha loãng với axit axetic 1,3 % vừa đủ\r\n50 ml, lọc qua giấy lọc 0,45 mm.

5.3.3.2.1.4 Dung\r\ndịch thử

Lấy 1 ml\r\nthuốc cho vào bình định mức 50 ml, hòa tan vừa đủ bằng axit axetic 1,3\r\n% lắc đều, lọc qua giấy lọc 0,45 mm.

Tiến hành\r\nđo riêng mẫu chuẩn và mẫu thử trên máy HPLC, ghi diện tích mẫu chuẩn\r\nvà mẫu thử

5.3.3.2.1.5 Tính\r\nkết quả

Dựa vào\r\ndiện tích pic chuẩn và pic thử để tính kết quả, theo công thức sau:

Trong đó:

S_T là diện\r\ntích pic của mẫu thử;

S_C là diện\r\ntích pic của mẫu chuẩn;

m_c là khối\r\nlượng của chất chuẩn, tính bằng gam (g);

m_t là khối\r\nlượng aspirin hoặc axit ascorbic trong mẫu thử, tính bằng gam (g);

C% là hàm\r\nlượng chất chuẩn.

5.3.3.2.2 Định\r\nlượng vitamin B₁₂

5.3.3.2.2.1 Điều\r\nkiện sắc ký

- Cột\r\nLichrosorb RP 18 (250 x 4,6 mm; 10 mm)

- Detector\r\nUV-vis bước sóng 550 nm

- Tốc độ\r\ndòng: 1 ml/ min

- Thể tích\r\nbơm: 20 ml

- Pha động:\r\ntrộn methanol/nước với tỷ lệ 35 : 65 (phần thể tích)

5.3.3.2.2.2 Dung\r\ndịch mẫu chuẩn

Cân 0,05 g\r\nvitamin B₁₂ chuẩn, hoà tan vừa đủ trong 50 ml nước cất, lắc\r\nđều. Lấy 2 ml dung dịch này pha loãng với nước cất vừa đủ 50 ml, lọc\r\nqua giấy lọc 0,45 mm.

5.3.3.2.2.3 Dung\r\ndịch thử

Lấy 10 ml\r\ndung dịch thuốc cho vào bình định mức 25 ml, làm vừa đủ bằng nước\r\ncất, lắc đều, lọc qua giấy lọc 0,45 mm.

Tiến hành\r\nđo riêng mẫu chuẩn và mẫu thử trên máy HPLC, ghi diện tích mẫu chuẩn\r\nvà mẫu thử.

5.3.3.2.2.4 Tính\r\nkết quả

Dựa vào\r\ndiện tích pic chuẩn và pic thử để tính hàm lượng chất chính theo công\r\nthức sau:

Trong đó:

S_T là diện\r\ntích pic của mẫu thử.

S_C là diện\r\ntích pic của mẫu chuẩn.

m_c là khối\r\nlượng chất chuẩn, tính bằng gam (g);

m_t là khối\r\nlượng chất cần thử, tính bằng gam (g);

C% là hàm\r\nlượng chất chuẩn.

5.3.3.2.3 Định\r\nlượng canxi gluconat bằng phương pháp chuẩn độ Complexon

Lấy 3 ml\r\nthuốc cho vào bình nón 500 ml.

Thêm 300 ml\r\nnước cất, 6 ml dung dịch natri hydroxit 10 M và khoảng 0,05 g hỗn hợp\r\nchỉ thị calcon.

Chuẩn độ\r\nbằng dung dịch trilon B 0,05 M đến khi dung dịch chuyển từ màu tím sang\r\nmàu xanh hoàn toàn.

1 ml dung\r\ndịch trilon B 0,05 M tương ứng với 0,02242 g canxi gluconat.

6. Bao gói, bảo quản và vận chuyển

Thuốc được\r\nđóng trong chai, lọ kín để nơi khô mát, tránh ánh sáng.