Lời nói đầu
\r\n\r\nTCVN 8400-4:2010 do Cục Thú y biên soạn,\r\nBộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất\r\nlượng thẩ
TCVN 8400 Bệnh động vật - Quy trình\r\nchẩn đoán gồm có các phần sau:
\r\n\r\n- TCVN 8400-1:2010 Bệnh động vật - Quy trình\r\nchẩ
- TCVN 8400-2:2010 Bệnh động vật - Quy trình\r\nchẩn đoán - Phần 2: Bệnh do vi khuẩn Streptococcus suis gây ra trên lợn;
\r\n\r\n- TCVN 8400-3:2010 Bệnh động vật - Quy trình\r\nchẩn đoán - Phần 3: Bệnh giun xoắn;
\r\n\r\n- TCVN 8400-4:2010 Bệnh động vật - Quy trình\r\nchẩn đoán - Phần 4: Bệnh Niu cát xơn.
\r\n\r\nCẢNH BÁO - Việc áp dụng\r\ntiêu chuẩn này có thể liên quan đến các vật liệu, thiết bị và các thao tác gây\r\nnguy hiểm. Tiêu chuẩn này không thể đưa ra được hết tất cả các vấn đề an toàn\r\nliên quan đến việc sử dụng chúng. Người sử dụng tiêu chuẩn này phải tự thiết lập\r\ncác thao tác an toàn sức khỏe thích hợp và xác định khả năng áp dụng các giới hạn\r\nquy định trước khi sử dụng tiêu chuẩn.
\r\n\r\n\r\n\r\nTiêu chuẩn này quy định quy trình chẩn\r\nđoán bệnh Niu cát xơn đối với gà.
\r\n\r\n\r\n\r\nTrong tiêu chuẩn này sử dụng thuật ngữ\r\nvà định nghĩa sau:
\r\n\r\nBệnh Niu cát xơn
Bệnh truyền nhiễm cấp tính, lây lan\r\ncho gà mọi lứa tuổi, bệnh gây ra bởi virus thuộc họ Paramyxoviridae phân nhóm\r\nPMV-1. Virus Niu cát xơn có nhiều chủng:
\r\n\r\n- Chủng có độc lực cao gây xuất huyết đường tiêu\r\nhóa;
\r\n\r\n- Chủng có độc lực cao gây tỷ lệ chết cao, có\r\ntriệu chứng hô hấp và thần kinh;
\r\n\r\n- Chủng có độc lực vừa phải gây triệu chứng hô\r\nhấp, đôi khi có triệu chứng thần kinh, tỷ lệ chết thấp;
\r\n\r\n- Chủng có độc lực yếu gây nhiễm đường hô hấp ở\r\nthể nhẹ hoặc cận lâm sàng;
\r\n\r\n- Chủng có độc lực yếu gây thể đường ruột nhẹ\r\n(Asymtomatic enteric).
\r\n\r\n3. Thuốc thử và vật\r\nliệu thử
\r\n\r\nChỉ sử dụng thuốc thử loại tinh\r\nkhiết phân tích và sử dụng nước cất hai lần hoặc nước đã khử khoáng hoặc nước\r\ncó độ tinh khiết tương đương, trừ khi có quy định khác.
\r\n\r\n- Natri clorua (NaCI).
\r\n\r\n- Kali clorua (KCI).
\r\n\r\n- Natri phosphat dibasic ngậm hai phân tử nước\r\n(Na2HPO4.2H2O).
\r\n\r\n- Kali dihydro phosphat (KH2PO4).
\r\n\r\n- Chất chống đông trinatri xitrat (C6H5Na3
- Cồn 96 %.
\r\n\r\n- Hồng cầu gà
\r\n\r\n- Kháng sinh: Penicyline,
- Kháng nguyên chuẩn Niu cát xơn.
\r\n\r\n- Kháng huyết thanh chuẩn Niu cát xơn.
\r\n\r\n- Mồi và probe đặc hiệu.
\r\n\r\n- Kit chiết tách RNA.
\r\n\r\n- Kit nhân gen.
\r\n\r\n\r\n\r\nSử dụng các thiết bị, dụng cụ của\r\nphòng thử nghiệm thông thường và cụ thể như sau:
\r\n\r\n- Tủ lạnh.
\r\n\r\n- Tủ ấm 37 °C.
\r\n\r\n- Tủ sấy từ 100 °C đến 200 °C.
\r\n\r\n- Tủ ấp trứng.
\r\n\r\n- Nồi hấp ướt.
\r\n\r\n- Máy li tâm Hematocrit.
\r\n\r\n- Máy ly tâm tốc độ đến 2000 xg.
\r\n\r\n- Máy ly tâm tốc độ trên 20000 xg.
\r\n\r\n- Máy realtime PCR.
\r\n\r\n- Máy lắc đĩa 96 giếng làm phản ứng ngưng kết.
\r\n\r\n- Micropipet đơn kênh cỡ từ 0,5
- Micropipet đa kênh cỡ từ 5
- Đầu tip phù hợp với các loại micropipet (có lọc\r\nvà không lọc).
\r\n\r\n- Ống nghiệm, dung tích 10 ml.
\r\n\r\n- Ống Eppendor
- Bơm tiêm, dung tích 1 ml, 2 ml, 5 ml.
\r\n\r\n- Bộ cối chày sứ.
\r\n\r\n- Dụng cụ dao, kéo, panh, kẹp.
\r\n\r\n- Đĩa phản ứng 96 giếng, đáy chữ
Lấy mẫu vào thời kỳ đầu của ổ dịch. Lấy\r\nngay sau khi con vật ốm, chết hoặc mổ khám.
\r\n\r\nMẫu bệnh phẩm là não (đầu gà), phủ tạng (gan, l
Mẫu được bảo quản và vận chuyển trong\r\nđiều kiện lạnh từ 2 °C đến 8 °C.
\r\n\r\nMẫu bệnh phẩm gửi đến phòng xét nghiệm\r\ncàng sớm càng tốt, kèm theo phiếu gửi bệnh phẩm.
\r\n\r\n\r\n\r\n6.1. Chẩn đoán lâm sàng
\r\n\r\n6.1.1. Dịch tễ học
\r\n\r\nNghiên cứu về diễn biến dịch tễ học\r\nnhư đường lây truyền bệnh, lứa tuổi mắc bệnh, tỷ lệ ốm, chết, nguồn bệnh,\r\nnguyên nhân gây bệnh... Bệnh Niu cát xơn lây lan chủ yếu qua tiếp xúc trực tiếp\r\ngiữa các\r\ngà\r\nkhỏe mạnh và gà bị nhiễm bệnh. Bệnh được truyền qua phân gia cầm mắc bệnh và\r\ncác dịch tiết từ mũi, miệng và mắt. Bệnh lây lan nhanh và có thể lây lan dễ\r\ndàng bằng phương tiện cơ học mang virus như giày dép và quần áo mang từ một đàn\r\nbị nhiễm đến. Virus Niu cát xơn có thể sống sót trong vài tuần trong môi trường\r\nẩm ướt trên lông chim, phân bón. Bệnh Niu cát xơn có tỷ lệ ốm và chết cao.
\r\n\r\n6.1.2. Triệu chứng lâm sàng
\r\n\r\n- Ủ rũ, ít vận động, nhắm mắt, uống nhiều\r\nnước, mào tím tái.
\r\n\r\n- Khó thở, ho, ngáp, lắc đầu, dịch nhớt chảy ra từ\r\nmũi, miệng, diều\r\ncăng\r\nđầy hơi.
\r\n\r\n- Giảm đẻ, trứng biến dạng, vỏ xù x
- Phân lỏng, màu trắng xanh, dính bết vào lông\r\nquanh lỗ huyệt.
\r\n\r\n- Gà bị bệnh sau từ 5 ngày đến 6 ngày xuất hiện\r\ntriệu chứng thần\r\nkinh:
6.1.3. Giải phẫu bệnh học
\r\n\r\nTùy theo thể bệnh có thể thấy nhiều hoặc\r\nmột trong những bệnh tích đặc trưng sau:
\r\n\r\n- Thanh, khí quản đọng dịch nhầy, xuất huyết.
\r\n\r\n- Phổi xuất huyết lấm tấm.
\r\n\r\n- Niêm mạc miệng, thực quản có điểm xuất huyết.
\r\n\r\n- Diều chứa đầy thức ăn và dịch. Niêm mạc giữa\r\ndạ dày tuyến và dạ dày cơ (cuống mề) có điểm xuất huyết.
\r\n\r\n- Niêm mạc ruột viêm, xuất huyết, có nốt loét h
- Buồng trứng xuất huyết, trứng non vỡ trong\r\nxoang bụng gây viêm phúc mạc.
\r\n\r\n6.2. Chẩn đoán phòng thí\r\nnghiệm
\r\n\r\n6.2.1. Phát hiện kháng\r\nnguyên
\r\n\r\n6.2.1.1. Xử lý bệnh phẩm
\r\n\r\nBệnh phẩm là phủ tạng, não lấy từ gia\r\ncầm chết, bị bệnh nghi nhiễm Niu cát xơn được nghiền thành huyễn dịch 10 % với\r\ndung dịch nước sinh lý hoặc PBS. Sau đó ly tâm với tốc độ 1000 xg trong 10 min.
\r\n\r\nThu lấy dịch nổi, xử lý vô trùng bằng\r\ndung dịch kháng khuẩn (
6.2.1.2. Phương pháp Realtime\r\nRT- PCR (rRT-PCR)
\r\n\r\n- Chiết tách ARN của virus Niu cát xơn: theo hướng\r\ndẫn của nhà sản xuất kít;
\r\n\r\n- Tiến hành phản ứng realtime RT-PCR (Phụ lục\r\nA).
\r\n\r\n6.2.1.3. Phân lập virus trên\r\ntrứng gà có phôi
\r\n\r\n6.2.1.3.1. Cách tiến hành
\r\n\r\n- Tiêm truyền huyễn dịch bệnh phẩm vào trứng gà\r\ncó phôi từ 9 ngày đến 11 ngày tuổi, tiếp
- Theo dõi trứng sau khi tiêm, thu hoạch nước\r\ntrứng (Phụ lục C);
\r\n\r\n- Làm phản ứng ngưng kết hồng cầu (HA) (Phụ lục\r\nD);
\r\n\r\n- Giám định các mẫu nước trứng dương tính HA bằng
- Ngoài ra có thể giám định virus Niu cát xơn bằng\r\nphản\r\nứng
6.2.1.3.2. Đánh giá kết qu
- Nếu kết quả HA dương tính và HI dương tính,\r\nxác định có virus Niu cát xơn trong mẫu.
\r\n\r\n- Nếu kết quả HA dương tính và HI âm tính, xác\r\nđịnh không có virus Niu cát xơn.
\r\n\r\n- Nếu kết quả HA âm tính, phôi chết, có xuất\r\nhuyết cần tiêm truyền lần 2. Nếu sau lần 2 vẫn âm tính th
6.2.2. Phát hiện kháng thể
\r\n\r\nPhát hiện kháng thể kháng Niu cát xơn\r\nbằng phải ứng HI với kháng nguyên chuẩn (Phụ lục E). Đàn gà chưa tiêm phòng Niu\r\ncát xơn mà dương tính kháng thể thì kết luận đàn đó nhiễm
6.2.3. Xác định độc lực của\r\nvirus Niu cát xơn (tùy theo yêu cầu chẩn đoán)
\r\n\r\nVirus Niu cát xơn có 3 nhóm độc lực\r\nchính:
\r\n\r\n- Nhóm độc lực cao (Velogenic)
- Nhóm độc lực vừa (Mesogenic): Triệu chứng\r\nhô hấp, đôi khi có triệu chứng thần kinh, tỷ lệ chết thấp.
\r\n\r\n- Nhóm độc lực yếu (Lentogenic): Gây nhiễm\r\nđường hô hấp ở thể nhẹ.
\r\n\r\nTheo OIE, chỉ số độc lực khi tiêm truyền\r\nvào não gà con (ICPI) được dùng để đánh giá độc lực của virus Niu cát xơn. Đối\r\nvới nhóm Lentogenic, chỉ
Gà được xác định mắc bệnh Niu cát xơn\r\nkhi có các đặc điểm dịch tễ học, triệu chứng lâm sàng, giải phẫu bệnh tích của\r\nbệnh Niu cát xơn và kết quả dương tính với một trong những phương pháp xét nghiệm\r\nsau:
\r\n\r\n- Phản ứng rRT-PCR phát hiện virus dương tính.
\r\n\r\n- Phân lập được virus trên trứng gà có phôi, và\r\ngiám định virus Niu cát xơn dương tính.
\r\n\r\nA.1
Chiết tách RNA theo hướng dẫn của nhà\r\nsản xuất kit.
\r\n\r\nA.2
A.2.1
Công thức này có thể thay đổi cho phù\r\nhợp với từng loại mồi và từng loại kit RT-PCR khác nhau. Dưới đây quy trình giới\r\nthiệu 2 bộ kit.
\r\n\r\n- Công thức áp dụng cho kit RT-PCR 1 bước của\r\nhãng Qiagen:
\r\n\r\n| \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n H2O \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n 5X hỗn hợp phản ứng \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n MgCl2 \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n dNTP \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n Hỗn hợp enzym \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n Mồi xuôi \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n Mồi ngược \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n Probe \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n Mẫu RNA \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n T | \r\n \r\n | \r\n
- Công thức áp dụng cho kit RT-PCR của\r\nhãng Invitrogen:
\r\n\r\n| \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n H2O \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n 2X hỗn hợp phản ứng \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n Hỗn hợp enzym \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n Mồi xuôi \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n Mồi ngược \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n Probe \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n Mẫu RNA \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n Tổng cộng \r\n | \r\n \r\n | \r\n
A.2.2
Đặt ống phản ứng vào máy chu kỳ nhiệt\r\nvà chọn chương trình chạy PCR bằng phần mềm trên máy vi tính.
\r\n\r\n| \r\n | \r\n \r\n | \r\n ||
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n |
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n ||||
| \r\n Avian | \r\n \r\n | \r\n \r\n Probe \r\n | \r\n \r\n TTCTCTAGCAGTGGGACAGCCTGC \r\n | \r\n \r\n FAM \r\n | \r\n \r\n BHQ1 \r\n | \r\n
| \r\n Xuôi \r\n | \r\n \r\n AGTGTAGTGCTCGGACCTT | \r\n \r\n None \r\n | \r\n \r\n None \r\n | \r\n ||
| \r\n Ngược \r\n | \r\n \r\n CCTGAGGAGAGGCATTTGCTA \r\n | \r\n \r\n None \r\n | \r\n \r\n None \r\n | \r\n ||
| \r\n Newcastle disease virus (vero+meso)\r\n (Fusion) \r\n | \r\n \r\n NDV-1 \r\n | \r\n \r\n Probe \r\n | \r\n \r\n AAGCGTTTCTGTCTCCTCCTCCA \r\n | \r\n \r\n TET \r\n | \r\n \r\n BHQ1 \r\n | \r\n
| \r\n Xuôi \r\n | \r\n \r\n GGTGAGTCTATCCGGARGATACAAG \r\n | \r\n \r\n None \r\n | \r\n \r\n None \r\n | \r\n ||
| \r\n Ngược \r\n | \r\n \r\n AGCTGTTGCAACCCCAAG \r\n | \r\n \r\n None \r\n | \r\n \r\n None \r\n | \r\n ||
| \r\n Newcastle disease virus (vero+meso)\r\n (Fusion) \r\n | \r\n \r\n NDV-2 \r\n | \r\n \r\n Probe \r\n | \r\n \r\n CCGGCATTCTGGTTTCACTCAA \r\n | \r\n \r\n FAM \r\n | \r\n \r\n BHQ1 \r\n | \r\n
| \r\n Xuôi \r\n | \r\n \r\n CGTTCTGAGGAATTTGACAGYMT \r\n | \r\n \r\n None \r\n | \r\n \r\n None \r\n | \r\n ||
| \r\n Ngược \r\n | \r\n \r\n GRAGCCATGCGAAYTTGG \r\n | \r\n \r\n None \r\n | \r\n \r\n None \r\n | \r\n ||
A.3
- Mẫu đối chứng dương tính (được chuẩn độ
- Mẫu có giá trị C
- Mẫu không có Ct được coi là âm\r\ntính.
\r\n\r\n- Mẫu có giá trị C
\r\n\r\n
Gà lấy máu là gà trống đã trư
Sát trùng vị trí lấy máu (tĩnh mạch\r\ncánh hoặc tim) bằng bông cồn 70 %.
\r\n\r\nDùng bơm ti
Rửa hồng cầu: Cho nước sinh lý (hoặc\r\nPBS) vào ống lấy máu, một lượng gấp đôi lượng
Pha hồng cầu thành huyễn dịch 1 %. V
Bảo quản huyễn dịch hồng cầu ở nhiệt độ\r\ntừ 4 °C đến 8 °C. Hồng cầu sau khi pha có thể dùng trong một tuần (nếu huyễn dịch hồng\r\ncầu bị dung huyết phải loại bỏ). Hồng cầu không dùng hết, cần cho nước sinh lý (hoặc\r\nPBS, Alserver) vào bảo quản. Khi cần, ly tâm lại để dùng.
\r\n\r\nC.1
Não hoặc các phủ tạng được nghiền\r\ntrong cối chày sứ vô trùng, pha thành huyễn dịch 1 : 10 v
C.2
- Dùng trứng gà có phôi từ 9 ngày tuổi\r\nđến 11 ngày tuổi, lấy từ trại gà sạch bệnh;
\r\n\r\n- Soi trứng, chọn phôi khỏe. Mỗi mẫu bệnh ph
- Sát trùng vỏ trứng bằng cồn 70 %. Dùi vị trí\r\ntiêm ở phía trên buồng hơi;
\r\n\r\n- Dùng bơm tiêm hút dịch bệnh phẩm rồi tiêm 0,2\r\nml vào xoang niệu mô;
\r\n\r\n- Gắn kín lỗ tiêm bằng keo;
\r\n\r\n- Ủ ấm trong tủ
- Các trứng có phôi chết hoặc gần chết để vào tủ\r\nlạnh 4 °C. Phôi nhiễm virus Niu cát xơn cường độc thường chết từ 24 h đến 60 h;
\r\n\r\n- Sau 5 ngày đến 7 ngày các trứng không chết được\r\nđể tủ lạnh 4 °C giết phôi.
\r\n\r\nC.3
- Mổ trứng trong điều kiện vô trùng. Sát trùng\r\nvỏ trứng bằng cồn 70 %;
\r\n\r\n- Dùng kéo cắt quanh buồng hơi, bộc lộ xoang niệu\r\nmô;
\r\n\r\n- Hút nước trứng vào ống Eppendorf vô trùng, bảo\r\nquản ở nhiệt độ 4 °C để kiểm tra;
\r\n\r\n- Kiểm tra bệnh tích: phôi có xuất huyết lấm t
Nước trứng sau khi thu hoạch được làm\r\nphản ứng ngưng kết hồng c
\r\n\r\n
D.1
- Hồng cầu gà 1 % (Phụ lục B).
\r\n\r\n- Nước trứng thu hoạch (hoặc kháng nguyên chuẩn\r\nNiu cát xơn).
\r\n\r\n- Dung dịch PBS pH từ 7,0 đến 7
D.2
Dùng đĩa ngưng kết 96 giếng, đáy chữ V\r\nhoặc chữ U
Pha loãng kháng nguy
Nhỏ thêm 25 ml PBS vào tất cả các giếng.
\r\n\r\nThêm hồng cầu: Mỗi giếng 25
D.3
- Phản ứng dương tính: Có hạt ngưng kết lấm chấm.
\r\n\r\n- Phản ứng âm tính: Hồng cầu lắng xuống đáy tạo\r\nthành chấ
Hiệu giá ngưng kết HA đư
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n |||||||||||
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n |
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n |||||||||
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n | \r\n
![](\"00912182_files/image001.gif\"){kind=small}
![](\"00912182_files/image002.gif\"){kind=small}
![](\"00912182_files/image003.gif\"){kind=small}
![](\"00912182_files/image004.gif\"){kind=small}
![](\"00912182_files/image005.gif\"){kind=small}
![](\"00912182_files/image006.gif\"){kind=small}
![](\"00912182_files/image007.gif\"){kind=small}
![](\"00912182_files/image008.gif\"){kind=small}
![](\"00912182_files/image009.gif\"){kind=small}
![](\"00912182_files/image010.gif\"){kind=small}
![](\"00912182_files/image011.gif\"){kind=small}
D.4
- Nếu HA dương tính: Kết luận c
- Nếu phản ứng HA âm tính: Có thể trong bệnh phẩm\r\nkhông có mặt virus Niu cát xơn hoặc lượng virus quá ít. Vì vậy, cần tiêm phôi\r\ntrứng 1 lần nữa (dùng nước trứng thu hoạch lần 1 để tiêm truyền)
\r\n\r\nE.1
- Dung dịch PBS pH từ 7
- Hồng cầu gà 1 %.
\r\n\r\n- Huyết thanh kiểm tra (hoặc kháng huyết thanh chuẩn\r\nNiu cát xơn).
\r\n\r\n- Kháng nguyên chuẩn Niu cát xơn (hoặc nước trứng\r\nthu hoạch).
\r\n\r\n- Kháng nguyên dùng cho phản ứng HI được pha 4\r\nHAU.
\r\n\r\nE.2
Ví dụ: Hiệu giá kháng nguyên trong phản\r\nứng HA là 1/256 thì 4 HAU bằng 1/256 x 4 = 1/64.
\r\n\r\nPha 4 HAU gồm 1 phần kháng nguyên và\r\n63 phần PBS.
\r\n\r\nChuẩn độ kh
E.3
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n |||||||||||
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n |
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n |||||||||
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n ||||||||||||
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n
| \r\n \r\n | \r\n
E.3.1
Dùng đĩa ngưng kết 96 giếng, đáy chữ V\r\nhoặc chữ U;
\r\n\r\nCho PBS vào mỗi giếng 25
Cho 25 ml huyết thanh cần kiểm tra vào giếng 1;
\r\n\r\nPha loãng huyết thanh: Trộn đều huyết\r\nthanh với PBS ở giếng 1, rồi hút 25 ml chuyển sang giếng 2 trộn đều, hút 25
Cho kháng nguyên 4 đơn vị HA vào các\r\ngiếng từ số 1 đến số 11, mỗi giếng 25 ml. Giếng 12 cho thêm 25 ml PBS;
\r\n\r\nLắc nhẹ, để 30 min ở nhiệt độ phòng;
\r\n\r\nCho hồng cầu: Mỗi giếng 25
E.3.2
Phản ứng dương tính: Hồng cầu lắng xuống\r\nđáy, chứng tỏ kháng nguyên và kháng thể tương ứng.
\r\n\r\nHiệu giá kháng thể được tính ở độ pha\r\nloãng cao nhất còn có hiện tượng ức chế ngưng kết hoàn toàn.
\r\n\r\nPhản ứng âm tính: Có hạt ngưng kết lấm\r\ntấm. Chứng tỏ không có sự kết hợp giữa kháng nguyên và kháng thể trong phản ứng.
\r\n\r\nE.4
Mẫu là huyết thanh kiểm tra kháng thể:\r\nCác con gà chưa được chủng vắc xin có kháng thể lớn hơn hoặc bằng 1/16 (4 log2)\r\nthì
Mẫu là kháng nguyên (nước trứng giám định virus\r\nphân lập):
\r\n\r\n- Nếu có hiện tượng ức chế ngưng kết với kháng\r\nhuyết thanh chuẩn Niu cát xơn chứng tỏ virus phân lập là virus Niu cát xơn.
\r\n\r\n- Nếu không có hiện tượng ức chế ngưng kết, mà\r\nphôi chết, có bệnh tích xuất huyết đồng thời HA dương tính thì trong bệnh phẩm\r\ncó virus (cũng gây ngưng kết hồng cầu) nhưng không phải Niu cát xơn. Có thể làm\r\nphản ứng HI với kháng huyết thanh chuẩn của một số virus khác (Cúm, EDS...) để\r\nxác định nguyên nhân bệnh.
\r\n\r\n\r\n\r\n
Chủng Virus phân lập (nước trứng) được\r\npha nồng độ 1 : 10 trong dung dịch PBS pH từ 7,0 đến\r\n7,4\r\nrồi\r\ntiêm vào não 10 gà con 1 ngày tuổi, với liều 0,05 ml/con.
\r\n\r\nGà được theo dõi trong 8 ngày liền,\r\nghi lại những biểu hiện sức khỏe.
\r\n\r\nBiểu hiện bệnh được tính bằng điểm:
\r\n\r\n- Bình thường: 0 điểm
\r\n\r\n- Ốm:
- Chết: 2 điểm (các ngày còn\r\nlại sau khi chết được chấm 2 điểm)
\r\n\r\nVí dụ thí nghiệm có kết quả theo dõi\r\nnhư trong bảng dưới đây:
\r\n\r\n| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n |||||||
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n |||
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n
| \r\n | \r\n \r\n | \r\n \r\n | \r\n ||||||||
Chỉ số ICPI đối với mỗi gà thí nghiệm\r\nlà số điểm trung bình của gà đó sau 8 ngày theo dõi. Điểm trung bình của cả lô\r\nthí nghiệm (10 gà) là chỉ số ICPI của virus Niu cát xơn được dùng. Theo OIE,\r\nnhóm Lentogenic có ICPI xấp xỉ 0. Nếu chỉ số ICPI ³ 0,7 thì virus Niu cát xơn phân lập được coi là có độc lực\r\ngây ra ổ
\r\n\r\n
[1] Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn\r\n- Cục Thú y, 2006. Tiêu chuẩn, quy trình ngành thú y, Quy trình chẩn đo
[2] O.I.E., 2009. Manual of Diagnostic\r\nTests and Vaccines for Terrestrial Animals, Ne
[3] Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn\r\n- Viện Thú y quốc gia 2002. (2002). Cẩm nang chẩn đoán tiêu chuẩn về các bệnh gia\r\nsúc ở Việt Nam, in lần thứ nhất, Bệnh New cát xơn, trang 172-173.
\r\n\r\nFile gốc của Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-4:2010 về Bệnh động vật – Quy trình chẩn đoán – Phần 1: Bệnh Niu Cát Xơn đang được cập nhật.
Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8400-4:2010 về Bệnh động vật – Quy trình chẩn đoán – Phần 1: Bệnh Niu Cát Xơn
Tóm tắt
| Cơ quan ban hành | Đã xác định |
| Số hiệu | TCVN8400-4:2010 |
| Loại văn bản | Tiêu chuẩn Việt Nam |
| Người ký | Đã xác định |
| Ngày ban hành | 2010-01-01 |
| Ngày hiệu lực | |
| Lĩnh vực | Nông nghiệp |
| Tình trạng | Còn hiệu lực |