TIÊU CHUẨN QUỐC\r\nGIA

TCVN\r\n12564:2018

THUỐC\r\nBẢO VỆ THỰC VẬT - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG HOẠT CHẤT BRODIFACOUM

Pesticides -\r\nDetermination of brodifacoum content

Lời nói đầu

TCVN 12564 : 2018 được xây dựng theo\r\nCIPAC MT 370 và TC 90/98-CL.

TCVN 12564 : 2018 do Cục Bảo vệ thực vật\r\nbiên soạn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn\r\nĐo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố.

THUỐC BẢO VỆ\r\nTHỰC VẬT - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG HOẠT CHẤT BRODIFACOUM

Pesticides -\r\nDetermination of brodifacoum content

1  Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp sắc\r\nký lỏng hiệu năng cao (HPLC) để xác định hàm lượng hoạt chất brodifacoum trong sản phẩm thuốc bảo\r\nvệ thực vật có chứa brodifacoum.

2  Tài liệu viện dẫn

Các tài liệu viện dẫn sau là rất cần\r\nthiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm\r\ncông bố thì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm\r\ncông bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi (nếu có).

TCVN 4851 (ISO 3696), Nước dùng để\r\nphân tích trong phòng thí nghiệm - Yêu cầu kỹ thuật và phương pháp thử

TCVN 12017:2017 Thuốc bảo vệ thực vật-\r\nLấy mẫu

3  Nguyên tắc

Hàm lượng brodifacoum được xác định bằng\r\nphương pháp sắc ký lỏng hiệu năng\r\ncao (HPLC), sử dụng cột pha đảo với detector tử ngoại (UV) ở bước sóng 254 nm\r\nvà dùng phương pháp ngoại chuẩn. Kết quả được tính dựa trên sự so sánh giữa số\r\nđo diện tích, thời gian lưu của píc mẫu thử và số đo diện tích, thời gian lưu của\r\npíc chuẩn.

4  Thuốc thử

Chỉ sử dụng các thuốc thử tinh khiết phân\r\ntích, nước dùng trong quá trình phân tích đạt loại 3 của TCVN 4851 (ISO\r\n3696) hoặc có độ tinh khiết tương đương.

4.1  Chất chuẩn\r\nbrodifacoum,\r\nđã biết hàm lượng, có giấy chứng nhận.

4.2  Axit acetic\r\nbăng,\r\ndùng cho sắc ký lỏng.

4.3  Methanol, dùng cho sắc\r\nký lỏng.

4.4  Dichloromethane, dùng cho sắc\r\nký lỏng.

4.5  Axit formic, dùng cho sắc\r\nký lỏng.

4.6  Dung dịch chiết\r\nmẫu,\r\ndicloromethane (4.5) + axit formic (4.6) tỷ lệ 50:1 theo thể tích.

4.7  Hỗn hợp dung\r\nmôi, dicloromethane\r\n(4.5) + methanol (4.3) tỷ lệ 2:3 theo thể tích.

4.8  Dung dịch\r\nchuẩn

4.8.1  Dung dịch\r\nchuẩn gốc

Dùng cân phân tích (5.7) cân khoảng\r\n0,01 g chất chuẩn brodifacoum (4.1), chính xác đến 0,00001 g vào bình định mức\r\n10 ml (5.2), hòa tan và định mức đến vạch bằng hỗn hợp dung môi (4.7). Đặt vào\r\nmáy siêu âm (5.6), siêu âm trong 10 min, để nguội đến nhiệt độ phòng - Dung dịch\r\nA.

4.8.2  Dung dịch\r\nchuẩn làm việc

Dùng pipet (5.3) hút chính xác 1 ml\r\ndung dịch A vào bình định mức 50 ml (5.2), định mức đến vạch bằng hỗn hợp dung\r\nmôi (4.7). Đặt vào máy siêu âm (5.6), siêu âm trong 1 min, để nguội đến nhiệt độ\r\nphòng.

CHÚ THÍCH: - Chất chuẩn bảo quản\r\ntrong tủ mát ở 20 °C ± 4 °C.

- Nếu sử dụng cân có cấp chính xác 0,0001 g thì lượng mẫu và\r\nchuẩn tăng lên 10 lần

- Dung dịch chuẩn nên bảo quản ở 2 °C - 4 °C;\r\ndung dịch chuẩn gốc và dung dịch chuẩn làm việc phải đánh giá trước khi sử dụng.

5  Dụng cụ, thiết bị

Sử dụng các thiết bị, dụng cụ thông\r\nthường của phòng thử nghiệm cụ thể như sau:

5.1  Cốc thủy\r\ntinh,\r\ndung tích 100 ml.

5.2  Bình định mức, dung tích 10\r\nml; 20ml; 50 ml; 100 ml.

5.3  Pipet, dung tích 1\r\nml; 5 ml; 10 ml.

5.4  Xyranh bơm mẫu,\r\ndung\r\ntích 50 µl, chia vạch đến 1 µl hoặc bơm mẫu tự động

5.5  Màng lọc PTFE, có kích thước\r\nlỗ rỗng 0,45 µm.

5.6  Máy siêu âm.

5.7  Cân phân\r\ntích, có\r\nđộ chính xác đến 0,00001 g.

5.8  Thiết bị cô cất\r\nchân không

5.9  Phễu chiết, dung tích\r\n250 ml; 500 ml.

5.10  Bình cầu cô\r\nquay,\r\ndung tích 500 ml.

5.11  Sàng rây, đường kính lỗ\r\n2 mm.

5.12  Thiết bị sắc\r\nký lỏng hiệu năng cao, được trang bị như sau:

- Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao với\r\ndetector tử ngoại (UV);

- Hệ thống bơm cao áp;

- Máy tích phân hoặc máy vi tính;

- Cột RP C18, 250 mm, đường kính 4,6\r\nmm, cỡ hạt pha tĩnh 5 µm hoặc loại tương đương;

- Bộ bơm mẫu tự động hoặc bơm mẫu bằng\r\ntay.

6  Cách tiến hành

6.1  Lấy mẫu và\r\nchuẩn bị mẫu

6.1.1  Lấy mẫu

Lấy mẫu theo TCVN 12017:2017.

6.1.2  Chuẩn bị mẫu

Mẫu cần được làm đồng nhất trước khi\r\ncân: đối với mẫu dạng lỏng phải lắc đều, nếu bị đông đặc do nhiệt độ thấp cần\r\nđược làm tan chảy ở nhiệt độ 30°C\r\n± 2°C; đối với mẫu dạng bột, hạt phải được trộn đều; đối với mẫu dạng bả thì phải\r\nnghiền mịn và rây qua rây có đường kính lỗ 2 mm, trộn đều làm mẫu phân tích.

6.1.3  Chuẩn bị dung\r\ndịch mẫu thử

6.1.3.1  Mẫu dạng thuốc\r\nkỹ thuật

Dùng cân phân tích (5.7) cân mẫu thử\r\nchứa khoảng 0,01 g hoạt chất brodifacoum, chính xác đến 0,00001 g vào bình định\r\nmức 10 ml (5.2), hòa tan và định mức đến vạch bằng hỗn hợp dung môi (4.7). Đặt\r\nvào máy siêu âm (5.6), siêu âm trong 10 min, để nguội đến nhiệt độ phòng - Dung\r\ndịch B.

Dùng pipet (5.3) hút chính xác 1 ml\r\ndung dịch B vào bình định mức 50 ml (5.2), hòa tan và định mức đến vạch bằng hỗn\r\nhợp dung môi (4.7). Đặt vào máy siêu âm (5.6), siêu âm trong 1 min, để nguội đến\r\nnhiệt độ phòng, lọc qua màng lọc 0,45 µm (5.5) trước khi bơm vào máy.

6.1.3.2  Mẫu dạng bả\r\nđậm đặc (dạng bả bột)

Dùng cân phân tích (5.7) cân mẫu thử\r\nchứa khoảng 0,25 mg hoạt chất broditacoum, chính xác đến 0,00001 g vào phễu chiết\r\ndung tích 250 ml (5.9). Thêm 100ml dung dịch chiết (4.6), lắc chiết trong 5\r\nmin, lọc qua bộ lọc vào bình cầu dung tích 500 ml (5.10), tráng rửa phễu chiết\r\nvà bộ lọc 3 lần, mỗi lần 50ml dung dịch chiết (4.6), gộp dịch chiết đã lọc vào\r\nbình cầu 500 ml (5.10). Chưng cất chân không ở 60°C ± 5°C cho đến\r\nkhi còn khoảng 1-2 ml, hòa tan và chuyển lượng còn lại vào bình định mức 10 ml (5.2) bằng hỗn\r\nhợp dung môi (4.7), định mức đến vạch bằng hỗn hợp dung môi (4.7), siêu âm 5\r\nmin, lọc qua màng lọc 0,45 µm (5.5) trước khi bơm vào máy.

6.1.3.3  Mẫu dạng bả đậm\r\nđặc (dạng bả lỏng)

Dùng cân phân tích (5.7) cân mẫu thử\r\nchứa khoảng 0,25 mg hoạt chất brodifacoum, chính xác đến 0,00001 g vào bình định\r\nmức 10 ml (5.2) hòa tan và định mức đến vạch bằng hỗn hợp dung môi (4.7). Đặt\r\nvào máy siêu âm (5.6), siêu âm 5 min, lọc qua màng lọc 0,45 µm (5.5) trước khi\r\nbơm vào máy.

6.1.3.4  Mẫu dạng bả bánh

Dùng cân phân tích (5.7) cân mẫu thử\r\nchứa khoảng 0,25 mg hoạt chất brodifacoum, chính xác đến 0,00001 g vào phễu chiết\r\ndung tích 500 ml (5.9). Thêm 250ml dung dịch chiết (4.6), lắc chiết trong 10\r\nmin, lọc qua bộ lọc vào bình cầu dung tích 500 ml (5.10), tráng rửa phễu chiết\r\nvà bộ lọc 3 lần, mỗi lần 50ml dung dịch chiết (4.6), gộp dịch chiết đã lọc vào\r\nbình cầu 500 ml (5.10). Chưng cất chân không ở 60°C ± 5°C cho đến\r\nkhi còn khoảng 1-2 ml, hòa tan và chuyển lượng còn lại vào bình định mức 10 ml (5.2) bằng hỗn\r\nhợp dung môi (4.7), định mức đến vạch bằng hỗn hợp dung môi (4.7). Đặt vào máy\r\nsiêu âm (5.6), siêu âm 5 min, lọc qua màng lọc 0,45 µm (5.5) trước khi bơm vào\r\nmáy.

6.2  Xác định hàm\r\nlượng hoạt chất

6.2.1  Điều kiện phân\r\ntích

Pha động: Methanol: nước : axit acetic\r\n=94,2 : 5,0 : 0,8 (theo thể tích)

Bước sóng: 254 nm

Tốc độ dòng: 1 ml/min

Thể tích bơm mẫu: 20 µl

Nhiệt độ buồng cột: 25°C

6.2.2  Xác định

Dùng xyranh bơm mẫu (5.4) bơm dung dịch\r\nchuẩn làm việc (4.8.2) cho đến khi số đo diện tích và thời gian lưu của pic chất\r\nchuẩn thay đổi không lớn hơn 1 %. Sau đó, bơm lần lượt dung dịch chuẩn làm việc\r\n(4.8.2) và dung dịch mẫu thử (6.1.3), lặp lại 2 lần (số đo diện tích và thời\r\ngian lưu của pic chuẩn thay đổi dao động động 1 % so với giá trị ban đầu; thời\r\ngian lưu của pic mẫu thử và mẫu chuẩn\r\nthay đổi dao động 1%).

7  Tính kết quả

Hàm lượng hoạt chất brodifacoum trong\r\nmẫu, X, biểu thị bằng phần trăm khối lượng (%) được tính theo công thức:

Trong đó:

S_m là tổng số\r\nđo trung bình diện tích của pic mẫu thử;

S_c là tổng số\r\nđo trung bình diện tích của pic chuẩn;

m_c là khối lượng\r\nchất chuẩn, tính bằng gam (g);

m_m là khối lượng mẫu\r\nthử, tính bằng gam (g);

P là độ tinh khiết\r\ncủa chất chuẩn, tính bằng phần trăm (%).

Kết quả phép thử là giá trị\r\ntrung bình các kết quả của ít nhất\r\nhai lần thử được tiến hành song song

Sai khác giữa hai kết quả xác định\r\nsong song không lớn hơn 0,03 g/kg, tại mức 0,7 g/kg

Sai khác giữa hai kết quả xác định\r\nsong song không lớn hơn 0,8 %, tại mức 98%

8  Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ:

a) mọi thông tin cần thiết về việc nhận\r\nbiết đầy đủ mẫu thử;

b) phương pháp lấy mẫu đã sử dụng;

c) phương pháp thử đã sử dụng và viện\r\ndẫn tiêu chuẩn này;

d) mọi thao tác không được quy định\r\ntrong tiêu chuẩn này, hoặc những điều được coi là tự chọn, và bất kỳ chi tiết\r\nnào có ảnh hưởng\r\ntới kết quả;

e) kết quả thử nghiệm thu được.

Phụ\r\nlục A

(Tham\r\nkhảo)

Giới thiệu hoạt chất brodifacoum

A1  Công thức cấu\r\ntạo: brodifacoum

A2  Tên IUPAC: 3-[3-4’-Bromobiphenyl-4-yl]-1,2,3,4-tetrahydro-1-naphthyl]-4-hydroxycoumarin

A6.  Nhiệt độ nóng\r\nchảy: 228-232°C

Thư mục tài\r\nliệu tham khảo

[1] CIPAC HANDBOOK 1C, MT 370, page\r\n1982

[2] TC 90/98-CL thuốc trừ chuột chứa\r\nhoạt chất brodifacoum-Yêu cầu kỹ thuật và phương pháp thử

[3] CDS Tomlin, The Pesticide Manual,\r\n17th Edition, 2015.