TIÊU\r\nCHUẨN QUỐC GIA

TCVN\r\n9019:2011

RAU\r\nVÀ QUẢ - XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT IMIDACLOPRID - PHƯƠNG PHÁP SẮC\r\nKÍ LỎNG KHỐI PHỔ

Vegetables\r\nand fruits -\r\nDetermination of imidacloprid pesticide residues - Liquid chromatography and\r\ntandem mass spectrometry method

Lời nói đầu

TCVN 9019:2011 do Cục Bảo vệ thực vật\r\nbiên soạn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn\r\nĐo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố.

RAU VÀ QUẢ -\r\nXÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT IMIDACLOPRID - PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỎNG\r\nKHỐI PHỔ

Vegetables\r\nand fruits -\r\nDetermination of imidacloprid pesticide residues - Liquid chromatography and\r\ntandem mass spectrometry method

1. Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác\r\nđịnh dư lượng hoạt chất thuốc bảo vệ thực vật (BVTV) imidacloprid trong rau và\r\nquả tươi bằng sắc kí lỏng khối phổ hai lần (LC/MS-MS).

2. Tài liệu viện dẫn

Các tài liệu viện dẫn sau là rất cần\r\nthiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm\r\ncông bố thì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi\r\nnăm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi.

TCVN 4851 (ISO 3696), Nước dùng để\r\nphân tích trong phòng thí nghiệm - Yêu cầu kỹ thuật và phương pháp thử.

3. Nguyên tắc

Dư lượng hoạt chất thuốc BVTV\r\nimidacloprid trong mẫu thử được chiết bằng dung môi diclometan, ete dầu mỏ và\r\naxeton, được xác định bằng thiết bị sắc kí lỏng khối phổ hai lần.

4. Thuốc thử

Chỉ sử dụng các thuốc thử tinh loại\r\nkhiết phân tích và nước phù hợp với loại 3 trong TCVN 4851 (ISO 3696), trừ khi\r\ncó quy định khác.

4.1. Axeton.

4.2. Diclometan.

4.3. Ete dầu mỏ.

4.4. Metanol loại dùng\r\ncho sắc kí

4.5. Natri sulfat khan, hoạt hóa ở 130 °C trong 8 h, để nguội, cho vào bình\r\nđậy kín, bảo quản trong bình hút ẩm.

4.6. Pha động 1: cân khoảng\r\n0,385 g amoni axetat (CH₃COONH₄) vào bình định mức 1000\r\nml, thêm 200 ml metanol, thêm nước cất đến vạch và siêu âm 15 min.

4.7. Pha động 2: cân khoảng\r\n0,385 g amoni axetat (CH₃COONH₄) vào bình định mức 1000\r\nml, thêm 900 ml metanol, thêm nước cất đến vạch và siêu âm 15 min.

4.8. Chất chuẩn imidacloprid, đã biết độ\r\ntinh khiết.

4.9. Dung dịch chuẩn gốc, nồng độ 1\r\n000 mg/ml.

Cân khoảng 0,01 g chất chuẩn\r\nimidacloprid, chính xác đến 0,01 mg, cho vào bình định mức dung tích 10 ml,\r\nthêm metanol đến vạch và trộn.

4.10. Dung dịch chuẩn trung\r\ngian 1,\r\nnồng độ 10 mg/ml.

Dùng micropipet lấy 200 ml dung dịch chuẩn gốc\r\ncho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch và trộn.

4.11. Dung dịch chuẩn trung\r\ngian 2,\r\nnồng độ 1 mg/ml.

Dùng pipet lấy 2 ml dung dịch chuẩn\r\ntrung gian 1 cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch và trộn.

4.12. Dung dịch chuẩn làm\r\nviệc

4.12.1. Dung dịch chuẩn làm\r\nviệc 1,\r\nnồng độ 2 ng/ml

Dùng micropipet lấy 40 ml dung dịch chuẩn trung\r\ngian 2 cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch và trộn.

4.12.2. Dung dịch chuẩn làm việc 2, nồng độ 20\r\nng/ml

Dùng micropipet lấy 400 ml dung dịch chuẩn\r\ntrung gian 2 cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch và trộn.

4.12.3. Dung dịch chuẩn làm việc 3, nồng độ 40\r\nng/ml

Dùng micropipet lấy 800 ml dung dịch chuẩn\r\ntrung gian 2 cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch và trộn.

4.12.4. Dung dịch chuẩn làm việc 4, nồng độ 60\r\nng/ml

Dùng micropipet lấy 120 ml dung dịch chuẩn\r\ntrung gian 1 cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch và trộn.

4.12.5. Dung dịch chuẩn làm việc 5, nồng độ 80\r\nng/ml

Dùng micropipet lấy 160 ml dung dịch chuẩn\r\ntrung gian 1 cho vào bình định mức dung tích 20 ml, thêm metanol đến vạch và trộn.

4.13. Khí nitơ, có độ tinh\r\nkhiết không nhỏ hơn 99,999 %.

5. Thiết bị, dụng cụ

Sử dụng các thiết bị,\r\ndụng cụ của phòng thử nghiệm thông thường và cụ thể như sau:

5.1. Bình định mức, dung tích\r\n10 ml; 20 ml và 1000 ml.

5.2. Pipet bầu, dung tích 2\r\nml và 5 ml, chia vạch đến 0,1 ml.

5.3. Micropipet, có thể đo từ\r\n20 ml đến 100 ml; 50 ml đến 200 ml và 200 ml đến 1000 ml.

5.4. Ống đong, dung tích 50\r\nml và 1000 ml.

5.5. Ống li tâm, dung tích\r\n250 ml.

5.6. Ống nghiệm, dung tích 15ml.

5.7. Cân phân tích, có thể cân\r\nchính xác đến 0,01 mg.

5.8. Cân, có thể cân chính xác\r\nđến 0,1 g.

5.9. Thiết bị đồng nhất, tốc độ\r\nkhông nhỏ hơn 18 000 r/min hoặc loại tương đương.

5.10. Thiết bị thổi khí nitơ.

5.11. Máy nghiền mẫu.

5.12. Máy lắc siêu âm.

5.13. Máy li tâm, tốc độ\r\nkhông nhỏ hơn 2 000 r/min, có ống li tâm dung tích 250 ml.

5.14. Thiết bị sắc ký lỏng khối phổ, được trang bị\r\nnhư sau:

- bơm, có thể tạo ra tốc độ dòng 0,7\r\nml/min;

- bộ đuổi khí (degasser);

- buồng cột, có thể kiểm soát được nhiệt\r\nđộ;

- detector khối phổ hai lần, có khoảng\r\nphổ từ 15 m/z đến 1650 m/z, độ phân giải tiêu chuẩn 0,7 amu;

- bộ bơm mẫu tự động;

- cột Zorbax SB 18, dài 150 mm, đường\r\nkính 4,6 mm, kích cỡ hạt 5 mm, hoặc loại tương đương;

- máy sinh khí nitơ, có thể tạo ra\r\nnitơ có độ tinh khiết 99,999 %;

- máy vi tính.

6. Lấy mẫu

Việc láy mẫu không được quy định trong\r\ntiêu chuẩn này. Nên lấy mẫu theo TCVN 5139:2008 (CAC/GL 33-1999).

7. Cách tiến hành

7.1. Yêu cầu chung

Toàn bộ qui trình phân tích cần được thực hiện trong ngày. Nếu cùng một lúc\r\nchuẩn bị nhiều mẫu thì tất cả các mẫu cần được phân tích trong ngày, sử dụng bộ\r\nbơm mẫu tự động.

7.2. Chuẩn bị mẫu

Mẫu thử được nghiền trong máy nghiền mẫu\r\nđến khi đồng nhất.

7.3. Chuẩn bị phần mẫu thử

Cân khoảng 20 g mẫu thử đồng nhất,\r\nchính xác tới 0,1 g, vào ống li tâm dung tích 250 ml. Thêm 40 ml axeton, đồng hóa trong 30 s bằng thiết bị đồng hóa với tốc độ\r\n13 500 r/min, thêm lần lượt 40 ml ete dầu mỏ, 40 ml diclometan, 5 g natri\r\nsulfat khan, đồng hóa trong 30 s bằng thiết\r\nbị đồng hóa với tốc độ 13 500 r/min, sau đó li tâm ở tốc độ 2 000 r/min trong\r\n10 min. Dùng pipet 5 ml lấy chính xác 4 ml dịch lỏng thu được cho vào ống nghiệm\r\nvà thổi khô hoàn toàn bằng thiết bị thổi khí nitơ ở nhiệt độ 40 °C. Hòa cặn bằng\r\n2 ml metanol để thu được phần mẫu thử.

7.4. Chuẩn bị phần mẫu trắng

Mẫu trắng là mẫu không chứa dư lượng\r\nthuốc imidacloprid, được chuẩn bị như phần (7.3)

7.5. Chuẩn bị phần mẫu kiểm tra hiệu\r\nsuất thu hồi

Cân khoảng 20 g mẫu trắng đã được đồng\r\nnhất chính xác tới 0,1 g vào ống li tâm dung tích 250 ml. Dùng micropipet thêm\r\n200 ml dung dịch\r\nchuẩn trung gian 2, để yên trong nhiệt độ phòng tối thiểu 15 min. Tiếp tục thực\r\nhiện như trong 7.3.

7.6. Điều kiện phân tích

Điều kiện MRM scan:

7.7. Dựng đường chuẩn

Dựng đường chuẩn (tương quan giữa diện\r\ntích pic và nồng độ chất chuẩn) tại 5 điểm có nồng độ tương ứng trong dung dịch\r\nchuẩn làm việc 1, dung dịch chuẩn làm việc 2, dung dịch chuẩn làm việc 3, dung\r\ndịch chuẩn làm việc 4 và dung dịch chuẩn làm việc 5.

7.8. Xác định

Bơm dung dịch phần mẫu trắng (xem\r\n7.4), dung dịch phần mẫu thử (xem 7.3), dung dịch phần mẫu kiểm tra hiệu suất\r\nthu hồi (xem 7.5) vào thiết bị sắc kí lỏng khối phổ. Dùng đường chuẩn để xác định\r\nnồng độ của phần mẫu thử và phần mẫu kiểm\r\ntra hiệu suất thu hồi khi bơm vào máy. Nếu nồng độ của mẫu thử nằm ngoài đường chuẩn thì điều chỉnh bằng cách pha\r\nloãng dung dịch phần mẫu thử (không phải pha loãng lượng mẫu bơm).

8. Tính kết quả

Dư lượng hoạt chất thuốc BVTV\r\nimidacloprid, X, biểu thị bằng miligam trên kilogam (mg/kg), được tính theo\r\ncông thức:

Trong đó:

X₀ là nồng độ của phần mẫu thử được xác định\r\ntừ đường chuẩn, tính bằng microgam trên mililit
\r\n(mg/ml);

V_E là thể tích\r\nphần mẫu thử định mức bằng metanol, tính bằng mililít (ml);

V₁ là thể tích\r\naxeton dùng để chiết, tính bằng mililít (ml);

V₂ là thể tích\r\nete dầu mỏ dùng để chiết, tính bằng mililít (ml);

V₃ là thể tích\r\ndiclometan dùng để chiết, tính bằng mililít (ml);

V₄ là thể tích\r\ndịch chiết được lấy ra để cô cạn, tính bằng mililít (ml);

m là khối lượng mẫu thử,\r\ntính bằng gam (g);

P là độ tinh khiết của\r\nchất chuẩn, tính bằng phần trăm (%).

9. Hiệu suất thu hồi\r\nvà giới hạn xác định

9.1. Hiệu suất thu hồi của phương pháp: từ 70 % đến\r\n110 %.

9.2. Giới hạn xác định của phương pháp (LOQ): 0,005\r\nmg/kg.

9.3. Độ lặp lại của phương pháp £ 15 %.

10. Báo cáo thử nghiệm

Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ:

a) mọi thông tin cần thiết về việc nhận\r\nbiết đầy đủ mẫu thử;

b) phương pháp lấy mẫu đã sử dụng, nếu\r\nbiết;

c) phương pháp thử đã sử dụng và viện\r\ndẫn tiêu chuẩn này;

d) mọi thao tác không được quy định\r\ntrong tiêu chuẩn này, hoặc những điều được coi là tự chọn, và bất kỳ chi tiết\r\nnào có ảnh hưởng tới kết quả;

e) kết quả thử nghiệm thu được.

PHỤ\r\nLỤC A

(tham khảo)

GIỚI THIỆU HOẠT CHẤT THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT\r\nIMIDACLOPRID

THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM\r\nKHẢO

[1] British Crop Protection Council 2003,\r\nThe Pesticide Manual.

[2] CEN/TC 275/WG 4. Food\r\nanalysis - Determination of pesticide residues by LC-MS/MS - Tandem mass\r\nspectrometric parameters.

[3] Food and Drug Aministration of USA,\r\n1994. Pesticide Analysis Manual. Volume I. Section 302, E1.

[4] TCVN 5139:2008 (CAC/GL 33-1999), Phương\r\npháp khuyến cáo lấy mẫu để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật phù hợp với\r\ncác giới hạn dư lượng tối đa (MRL).